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金黄色葡萄球菌RNA快速提取试剂盒

金黄色葡萄球菌RNA快速提取试剂盒,无需苯酚/氯*抽提,无gDNA残留

产品编号:2154A

产品规格:50次

产品价格:2160

包装:

储存条件:RT

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金黄色葡萄球菌RNA快速提取试剂盒(离心柱型)


一.  产品介绍:

本公司推出无需苯酚、氯*RNA快速提取技术基础上,又研发成功基因组DNA清除柱技术确保有效清除gDNA残留,得到的RNA不需要DNase消化,可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,然后裂解混合物通过一个基因组DNA清除柱,基因组DNA被清除而RNA穿透滤过。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除, 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

 

二.  产品特点:

1.完全不使用有毒的苯酚,氯*等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。

2.快速,简捷,单个样品操作一般可在30分钟内完成。

3.基因组DNA清除柱技术确保有效清除gDNA残留,得到的RNA不需要DNase消化,可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。

4.多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.9~2.0,基本无DNA残留,可用于RT-PCR,Northern-blot和各种实验。

 

三.  适用范围:

适用于快速提取革兰氏阳性菌总RNA,eg.金黄色葡萄球菌,使用独有基因组DNA清除柱技术确保有效清除gDNA残留,不需要使用DNase消化,RNA可直接用于反转录PCR,荧光定量PCR。

 

四.  储存条件:

1.所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清。

2.不合适的储存于低温(4℃或者-20℃)会造成溶液沉淀,影响使用效果,因此运输和储存均在室温下(15℃-25℃)进行。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。

 

五.  注意事项:

1.       所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机,如Eppendorf5415C或者类似离心机。

2.       样品处理量绝对不要超过基因组吸附柱DA和和RNA吸附柱RA处理能力,否则造成DNA残留或产量降低。开始摸索实验条件时,如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量,将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。

3.       裂解液RLT Plus和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作时戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。

4.       关于DNA的微量残留:

一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留(DNase消化也无法做到100%无残留),本公司的EASYspin Plus RNA提取产品,由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA清除柱技术,绝大多数DNA已经被清除,不需要DNase消化,可直接用于反转录PCR和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA表达量分析荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时:

1)     选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。

2)     选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。

3)     将RNA提取物用RNase-free的DNase I处理。本试剂盒还可以用于DNase I处理后的RNA清洁(cleanup),请联系我们索取具体操作说明书。

4)     在步骤去蛋白液RW1漂洗前,直接在吸附柱RA上进行DNase I处理。请联系我们索取具体操作说明书。

5.       RNA纯度及浓度检测:

完整性:RNA可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件:胶浓度1.2%;0.5×TBE电泳缓冲液;150v,15分钟)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA为rRNA,电泳后UV下应能看到非常明显的rRNA条带。动物rRNA大小分别约为5 kb和2kb,分别相当于28S和18S rRNA。动物RNA样品中最大rRNA亮度应为次大rRNA亮度的1.5-2.0倍,否则表示RNA样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。

纯度:OD260/OD280比值是衡量蛋白质污染程度的参考指标。高质量的RNA,OD260/OD280读数(10mMTris, pH7.5)在2.1-2.2之间(100%纯的RNA比值一般是2.2左右,很多公司无法达到这个标准,所以1.9-2.0就凑合用了,但是我们的产品标准一般可以达到2.1-2.2)。OD260/OD280读数受测定所用溶液的pH值影响。同一个RNA样品,假定在10mMTris,pH7.5溶液中测出OD260/OD280读数1.8-2.1之间,在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间,但这并不表示RNA不纯

浓度:取一定量的RNA提取物,用RNase-free水稀释n倍,用RNase-free水将分光光度计调零,取稀释液进行OD260, OD280测定,按照以下公式进行RNA浓度的计算:终浓度(ng/μl)= (OD260)×(稀释倍数n)×40

 

六.  操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)

提示:详细操作说明书请加QQ 索要说明书。


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2. 专业的引物设计技能,保证qPCR引物的特异性;

3. 熟练的qPCR操作技能,保证完美的qPCR结果;

qPCR实验流程图

送样要求:

1. 细胞(≥106 )、新鲜动植物组织(≥300mg)、血液(≥1ml)、叶片(≥100mg)等样品材料,基因组DNA或总RNA(总RNA>2μg,体积≥20μl,浓度≥100 ng/μl)。
2. 靶基因信息和背景资料:基因序列或GenBank Accession Number等,生物物种信息(Human、Mouse、Rat 等)、DNA/RNA 来源、基因丰度等。

提供服务:
引物探针设计合成,RNA提取,反转录,RNA电泳,引物筛选,上机定量检测。

提交结果:
原始数据(CT值和各种统计值,融化温度图,扩增曲线图,电泳图,柱状图)、数据分析结果及详细实验报告。