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病毒基因组DNA/RNA快速提取试剂盒(离心柱型)

采用特异性结合病毒DNA/RNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,病毒DNA/RNA提取试剂盒适合于从无细胞体液,包括血浆、血清、腹水、培养细胞上清液、脑脊髓液及尿液等中快速提取高纯的病毒DNA/RNA。该产品可以满足绝大多数的病毒RNA/DNA的同时提取要求, 如病毒RNA:HCV(丙肝病毒),HIV(艾滋病毒),和HTLV(人类嗜T淋巴细胞病毒); 病毒DNA:HBV(乙肝病毒)和CMV(巨细胞病毒)等等。

产品编号:2124

产品规格:50次

产品价格:1188

包装:

储存条件:4℃

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病毒基因组DNA/RNA快速提取试剂盒(离心柱型)


一.产品介绍:
采用特异性结合病毒DNA/RNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,病毒DNA/RNA提取试剂盒适合于从无细胞体液,包括血浆、血清、腹水、培养细胞上清液、脑脊髓液及尿液等中快速提取高纯的病毒DNA/RNA。该产品可以满足绝大多数的病毒RNA/DNA的同时提取要求, 如病毒RNA:HCV(丙肝病毒),HIV(艾滋病毒),和HTLV(人类嗜T淋巴细胞病毒); 病毒DNA:HBV(乙肝病毒)和CMV(巨细胞病毒)等等。病毒裂解后,DNA/RNA后在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜(特别配备了Poly Carrier可以从体系中轻松捕获微量核酸),再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的病毒DNA/RNA从硅基质膜上洗脱。纯化后的病毒核酸无杂质和PCR抑制剂,可直接适用于PCR/RT-PCR分析。

二.产品特点:
1.不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.节省时间,简捷,单个样品操作一般可在20分钟内完成。
3.多次柱漂洗确保高纯度,提取的病毒DNA/RNA 纯度高,质量稳定可靠,可适用于各种常规操作,包括PCR/RT-PCR、酶切、测序、Southern 杂交等。

三.注意事项:
1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2.开始实验前将需要的水浴先预热到特定温度备用。
3.裂解液VLB和去蛋白液RE中含有刺激性化合物,操作时戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4.Poly Carrier:
Poly Carrier使用方法:如果起始处理量很少,我们推荐使用Poly Carrier,如果预期有较大量核酸产量,用户可以根据需要选择是否加入Poly Carrier。使用时在每个样品提取所需裂解液VLB中加入4μl Poly Carrier储存溶液, 将裂解液VLB与Poly Carrier溶液充分颠倒混匀即可(裂解液VLB容易起泡沫,请勿使用涡旋振荡混匀)。也可根据样品数量,在总共需要的裂解液VLB中加入总共需要的Poly Carrier混匀备用。混合液在室温24小时内稳定。

四.操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
提示:第一次使用前请先在10ml漂洗液RW中加入40ml无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!


1.200μl血清等体液(需回复到室温,不足可用0.9% NaCl或者PBS补足)转入上述1.5ml离心管,加入400μl 裂解液VLB, 立刻涡旋振荡充分混匀。
如果处理样品量小或者病毒预期浓度较低,建议在400μl裂解液VLB中加入4μl Poly Carrier储存溶液。


2.室温(15-25℃)放置10分钟,每隔5分钟,振荡混匀一次。


3.加入450μl无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀。
如果周围环境高于25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。


4.将上述混合物加入一个吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液。
如果总体积超过750μl,可分两次将溶液加入同一个吸附柱RA中。


5.加500μl去蛋白液RE,12,000rpm离心30秒,弃废液。


6.加入500μl漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30秒,弃废液,加入500μl漂洗液RW,重复一遍。


7.将吸附柱RA放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。


8.取出吸附柱RA,放入一个RNase free的离心管中,在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free H20(事先在 65-70℃水浴中加热效果更好), 室温放置1分钟,12,000rpm 离心1分钟。如果想得到较多量的DNA/RNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,12,000rpm离心1分钟。
洗脱体积越大,洗脱效率越高。如果需要DNA/RNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是最小体积不应少于20μl,体积过小降低洗脱效率,减少DNA/RNA产量。


9.病毒DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。病毒RNA建议最好立刻使用,否则立刻短期放置在-70℃备用。


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qPCR实验流程图

送样要求:

1. 细胞(≥106 )、新鲜动植物组织(≥300mg)、血液(≥1ml)、叶片(≥100mg)等样品材料,基因组DNA或总RNA(总RNA>2μg,体积≥20μl,浓度≥100 ng/μl)。
2. 靶基因信息和背景资料:基因序列或GenBank Accession Number等,生物物种信息(Human、Mouse、Rat 等)、DNA/RNA 来源、基因丰度等。

提供服务:
引物探针设计合成,RNA提取,反转录,RNA电泳,引物筛选,上机定量检测。

提交结果:
原始数据(CT值和各种统计值,融化温度图,扩增曲线图,电泳图,柱状图)、数据分析结果及详细实验报告。